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單寧含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2023-07-06      瀏覽次數(shù):1171

規(guī)格:100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體100mL×2瓶,4℃保存。試劑一:粉劑×1瓶,常溫保存。


 

 

微量法


標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1支,10mg單寧酸,4℃保存。臨用前加入1.175mL提取液溶解為5000nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說(shuō)明:

單寧又稱(chēng)植物多酚,是一類(lèi)廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物。單寧可作為潛在的生物標(biāo)記物;與蛋白質(zhì)結(jié)合的能力又稱(chēng)為收斂性或澀性。其收斂性是多種生理活性的基礎(chǔ),如止血、抗腫瘤、抗衰老等生理活性,也是影響產(chǎn)品口感的因素之一。

根據(jù)光譜特性,單寧在275nm下有較強(qiáng)的紫外吸收,通過(guò)利用活性炭能夠特異吸附單寧的性質(zhì)來(lái)檢測(cè)單寧含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96UV板和蒸餾水。

測(cè)定操作:

1、樣本處理:

將樣本烘干至恒重,粉碎,過(guò)40目篩之后,稱(chēng)取約0.05g,加入1mL提取液,封口膜封口防止液體濺出,于70℃水浴提取30min,期間可搖晃數(shù)次。12000rpm,25℃,離心10min,取上清,用提取液定容至1mL,待測(cè)。

2、操作步驟:

1)紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,波長(zhǎng)調(diào)至275nm。蒸餾水調(diào)零。

25000nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液用提取液稀釋為6.25、3.125、1.5625、0.78625、0.4、0.2nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3)加樣表:

試劑名稱(chēng)

測(cè)定管

對(duì)照管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

試劑一

大約5-7mg

-

-

大約5-7mg

蒸餾水

-

-

-

0.5mL


標(biāo)準(zhǔn)溶液

-

-

0.5mL

-

樣品

0.5mL

0.5mL

-

-

充分混勻震蕩5min,13000g 離心20min。取200µL上清液測(cè)定275nm下的吸光度,分別記為A測(cè)定管、A對(duì)照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管,計(jì)算?A測(cè)定=A對(duì)照管-A測(cè)定管,A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。

單寧含量計(jì)算:

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,以A標(biāo)準(zhǔn)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到方程y=kx+b,將?A測(cè)定帶入方程中得到xnmol/mL

2、單寧含量計(jì)算:

1. 按蛋白濃度計(jì)算:

單寧含量(nmol/mg prot=x×V提取÷(V提取×Cpr) =x÷Cpr。

2. 按樣本鮮重計(jì)算:

  nmol/g =x×V   ÷W =x÷W 。Cpr 樣品蛋白濃度,mg/mL(蛋白濃度需重新用PBS提取測(cè)定);W:樣品質(zhì)量,gV提?。?/span>

提取液體積,2mL。

注意事項(xiàng):

1、 當(dāng)?A大于1.5時(shí),建議將樣品上清液用提取液稀釋更大倍數(shù)后測(cè)量;?A過(guò)小時(shí),建議減少稀釋倍數(shù)或增加樣品質(zhì)量來(lái)測(cè)定。


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